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    89Zr标记PD-L1单抗及荷瘤鼠免疫PET显像
    发表时间:2018-04-20
     
    目的: 89Zr标记PD-L1单抗的制备及 Micro PET扫描beplay体育官网登陆89Zr-PD-L1单抗在荷瘤小鼠体内的肿瘤靶向和分布特征,为后续药效评价实验和进一步的免疫PETbeplay体育官网登陆提供依据。
     
    实验方法: 
    89Zr标记和质量控制
    首先利用去铁胺类双功能偶联剂(p-SCN-Bn-Deferoxamine)对PD-L1单抗进行结构修饰,体外活性检测表明,其活性可保持原抗体的70%以上。其次利用89Zr-草酸锆原液标记去铁胺修饰的单抗Dfo-PD-L1,经葡聚糖凝胶柱进行分离纯化除去游离的89Zr,获得89Zr标记的目标产物89Zr- PD-L1。最后,通过Radio-HPLC分析方法对89Zr- PD-L1进行质量控制和体外稳定性检测。
     
    动物PET扫描方法
    3只人黑色素肿瘤模型雄性小鼠尾静脉注射150±50 μCi的89Zr-PD-L1,随后在不同时间点(1 h至168 h)分别进行Micro PET扫描(扫描时间:10-30 min)。
    扫描采集结束后,对PET图像进行分析,勾画肿瘤、心脏、肾脏、脑和骨关节为感兴趣区域(Region of Interest,ROI),计算%ID/g值,进而分析89Zr-PD-L1抗体在肿瘤组织及体内主要脏器的分布情况。
     
    实验结果:
    质控结果
    Radio-HPLC结果表明89Zr- PD-L1化学纯度为99.49%,放射性化学纯度99.3%,多聚物含量小于1%。体外稳定性检测显示,终产物保存于中性醋酸/醋酸钠缓冲溶液,4 ℃,在24 h时检测发现放射性化学纯度>95%,未见明显脱锆。
     
    Micro PET扫描结果
    图1:荷瘤小鼠静脉给予89Zr-PD-L1后不同时间点的PET扫描断层图


    图2:89Zr-PD-L1抗体在体内主要脏器的分布情况
     
    荷瘤小鼠注射 89Zr-PD-L1后,在6 h至168 h期间获取的Micro PET扫描图上可以可以清晰的看到放射性物质在瘤组织处有明显的特异性浓聚,摄取值随时间持续上升,至96 h达到最高,%ID/g值为24.22±2.66(n=3)。 
     
    结论
    对所beplay体育官网登陆的PD-L1单抗进行了有效的89Zr标记,并通过黑色素肿瘤小鼠模型PET显像实验揭示了89Zr-PD-L1有良好的肿瘤靶向性,在其它非靶脏器中的摄取相对较低,清除较快。该放射性免疫示踪剂在肿瘤的PET显像诊断和监测PD-L1单抗的肿瘤靶向和治疗方面有应用潜力。